DU8-primery pro klonování
Completion requirements
Opened: Monday, 24 March 2025, 5:00 PM
Due: Thursday, 10 April 2025, 5:00 PM
1) Zjistěte zda a kolikrát štěpí CDS sekvenci vašeho genu enzymy: XhoI, HindIII, SacI
2) Jaké fragmenty z vaší CDS vzniknou po štěpení všemi těmito enzymy?
3) Vyberte RE, kterou byste štěpili vaši CDS jednou a výsledek na gelu by vhodně potvrdil vznik předpokládaného produktu
4) navrhněte primery pro amplifikaci „vašeho“ genu pro zaklonování do plasmidu pGL3
→zkontrolujte sekvenci, které RE budou vhodné (tj. cílová sekvence neobsahuje příslušná štěpná místa)
→vložte příslušné sekvence do primerů pro PCR
→“vylaďte“ Tm obou primerů, aby se příliš nelišily (odebírání, přidávání (náhodných) nukleotidů a kontrola v OligoCalc)
