DU8-primery pro klonování
Požadavky na absolvování
Otevřené: pondělí, 24. března 2025, 17.00
Termín: čtvrtek, 10. dubna 2025, 17.00
1) Zjistěte zda a kolikrát štěpí CDS sekvenci vašeho genu enzymy: XhoI, HindIII, SacI
2) Jaké fragmenty z vaší CDS vzniknou po štěpení všemi těmito enzymy?
3) Vyberte RE, kterou byste štěpili vaši CDS jednou a výsledek na gelu by vhodně potvrdil vznik předpokládaného produktu
4) navrhněte primery pro amplifikaci „vašeho“ genu pro zaklonování do plasmidu pGL3
→zkontrolujte sekvenci, které RE budou vhodné (tj. cílová sekvence neobsahuje příslušná štěpná místa)
→vložte příslušné sekvence do primerů pro PCR
→“vylaďte“ Tm obou primerů, aby se příliš nelišily (odebírání, přidávání (náhodných) nukleotidů a kontrola v OligoCalc)
